不动精子怎么做ICSI

1992年，卵胞浆内单精子注射技术 (ICSI)获得首例活产为男性不育患者带来希望，使用附睾和睾丸的精子可以帮助无精症的男性不育患者拥有后代。而ICSI成功受精的先决条件是需要有存活的精子。针对死精子症患者和需行外科取精手术所获的精子来说，如何筛选最具有使卵母细胞受精潜力的精子成为胚胎实验室面临的难题。

一、外科取精术

无精子症，临床上分为梗阻性无精子症(OA)和非梗阻性无精子症(NOA)。

OA一般通过附睾穿刺，显微附睾精子抽吸术或经皮附睾穿刺抽吸术获得精子。

NOA则多通过睾丸活检，如睾丸穿刺活检取精术或显微镜下睾丸显微取精术获得精子。

二、外科取精术所获精子的处理

附睾穿刺取精可获得大量精子，但也有少量的红细胞和一些杂质，故均应对精子进行洗涤。一般经单层梯度离心后，将沉淀下来的精子混匀，用于精子选择。

显微手术取精术中获得的睾丸组织通常含有大量血细胞，严重影响精子的观察，特别是不动精子的观察。对于这样的标本，常规方法仍然以机械划碎睾丸组织寻找精子，酶处理方法目前未广泛应用。

三、活的不动精子筛选方法

1、机械接触技术(MTT)：该技术是用注射针接触精子尾部，观察精子尾部是否柔软。若尾巴柔软并可恢复至其原形态，则判断该精子为活精子。若尾巴僵硬且不能恢复至原形态，则认为该精子是死精。MTT的优点是不使用化学物质且不改变精子的完整性，从而使得精子，可随时行ICSI。但该技术的缺点是准确度低，检测也非常耗时。

2、低渗肿胀试验(HOST)：其原理是在加水的低渗条件下，具有正常细胞膜功能的活精子尾部会肿胀或卷曲。经过对不同的低渗溶液进行比较，改良出一种更简便的低渗试验。但是试验假阳性和假阴性率较高，降低了低渗肿胀试验的准确性。

3、化学活性增强剂：将取出的精子进行培养一段时间，使精子成熟从而获得运动能力，观察活性。例如己酮可可碱（PTF），可促进精子的运动，但是安全性还需进一步验证。另有研究表明，黄嘌呤家族的另一成员茶碱，也可提高精子活力但时效较短。将己酮可可碱或茶碱治疗用于临床，目前虽未见子代异常的报道，但仍需更多的随访研究以证明其安全性。

4、激光辅助不动精子选择 ：高倍视野下选择形态较好的精子，在精子尾部靠近尾巴尖端处用激光击打。如果激光击打后精子尾部立即出现明显的卷尾现象，则判定为存活精子。若未观察到精子卷尾，则表明该精子为死精。激光的优点是不需要任何化合物诱导精子运动，但其是否会对精子染色质产生影响尚有待研究。

5、双折射偏振显微镜技术：正常情况下，活精子的头部结构使其可自然双折射，而死精子因结构不同不能发生双折射。应用偏振光显微镜可以观察到精子头部的双折射，判断精子的活力。该方法尚缺乏大样本研究，且双折射偏振显微镜设备较贵。

最后，可以说以上技术都可以选择活的不动精子。但每种技术都各有利弊，目前也没有更多的随访数据来评估它们的安全性。因此，在临床应用前仍需要仔细研究安全性和伦理问题。